1.Q：动物的饲养环境情况如何？
A:我们所有的动物都饲养在屏障环境的独立通风笼盒（individually ventilated cages ，IVC）中，以最大程度地保证动物饲养环境的独立性。该屏障环境的设施情况获得上海市实验动物监测所的认证，能够满足SPF级实验动物饲养的需求。动物饲养及实验过程的控制遵照动物健康及福利要求。
2. Q:常用的近交系小鼠有哪些？
A:一般常用的近交系小鼠有以下几种：C57BL/6、FVB、129、Balb/c等。C57BL/6毛色为黑色、129为浅腹棕灰色、FVB、Balb/c均为白色。
3.Q：为什么要构建敲入小鼠，转基因小鼠或者基因敲除小鼠，对课题会有什么帮助？
A：基因敲入/基因敲除/转基因小鼠可以用来研究基因的功能、基因与疾病的关系、疾病动物模型等。
4.Q：转基因、敲除或敲入的小鼠构建时，如果注射受精卵，受精卵都是什么品系的小鼠？
A：采用受精卵注射方法的时候，受精卵默认是C57BL/6N，但如果用户有特殊需求，可以提出。
5.Q：你们的ES细胞的来源是什么品系的小鼠？
A：我们的ES细胞来源有两种，一种是129: E14，来自129Ola小鼠，另外一种是B6：JM8A3， 来自C57BL/6N小鼠。
6. Q：转基因小鼠，通常注射多少个受精卵？移植几只小鼠?
A：我们根据多年的实践总结出的经验，通常会注射50-80个卵，移植4-5只小鼠。
7. Q：完全基因敲除小鼠，通常注射多少个受精卵？移植几只小鼠？
A：和转基因小鼠相当，敲除小鼠通常也会注射50-80个卵，移殖4-5只小鼠。
8. Q：采用ES细胞进行基因打靶时，通常注射多少个囊胚，每个囊胚注射多少个ES？
A：我们采用ES细胞进行基因打靶的小鼠构建时，至少会选择3个独立的克隆；每个克隆注射50-80个囊胚；每个囊胚注射12-15个ES细胞；每只小鼠移植12-15个囊胚。
9. Q：SgRNA体外转录载体的制备是只有打受精卵的时候才需要，用ES细胞的话是不需要的吗？
A:是的，注射受精卵需要SgRNA、Cas9的mRNA；转染ES细胞只需要用质粒即可。
10. Q：SgRNA的效率要达到多高才叫高效率？你们的认可标准是什么？
A：我们按照多年的实践经验，测序的杂峰高于３０％才能接受，进行下一步的实验。
11.Q: 什么是ES细胞显微注射？
A:胚胎干细胞显微注射是制作基因敲除小鼠的一个最常用的方法。主要过程是将携带目的基因的胚胎干细胞注射到小鼠的囊胚腔中获得嵌合体小鼠。所得嵌合体小鼠的组织，将同时含有来源于囊胚的细胞和胚胎干细胞。嵌合体小鼠必须和野生型小鼠配种以决定遗传改变的生殖系能否传递，这样可能获得转基因或打靶基因（来源于胚胎干细胞）稳定的生殖系传递的小鼠。一般情况下，大约能获得50%继承了目的基因的后代。用胚胎干细胞注射与DNA显微注射类似，首先要对囊胚的供体鼠进行超排和交配以获得大量的胚胎，然后将注射了胚胎干细胞的囊胚移植到代孕母鼠输卵管（或子宫）使胚胎继续发育。
12. Q：显微注射需要排队吗？
A：目前公司处在高效运转的状态，基本是不用排队，通常两周之内可以进行显微注射。
13. Q：受精卵注射和囊胚注射的差别?
A：受精卵注射一般用于转基因或者完全基因敲除小鼠，适用于质粒转基因和Crispr-Cas9技术；囊胚注射主要用于构建条件性敲除、敲入小鼠，适用于ES细胞技术。
14. Q: 从DNA显微注射到获得转基因动物需要多久？
A:通常，从收到DNA到交付首代小鼠大约需要8周。DNA制备的质量和浓度测定的准确性会显著地影响结题周期，因此我们会要求更换不符合我们标准的DNA。对于那些只需要转基因胚胎的服务项目，时间可短至4-5周。然而，如果需要增加注射的次数，则周期可依据情况延长。
15. Q：用Crispr-Cas9技术辅助ES细胞筛选，这个方法有什么优点？
A: 采用Crispr辅助ES细胞的方法可以提高同源重组的效率，可以提高成功率。Crispr造成的DNA切口可以大大提高同源重组的效率，将打靶效率提高一个数量级。
16.Q：你们是否提供Cre小鼠？
A:Flox模型需要与特定的Cre工具鼠交配才能实现敲除，工具鼠中Cre重组酶的表达区域决定Flox基因的敲除区域，如果Cre重组酶是诱导表达（Inducible）的那么Flox基因的敲除也可以诱导。
基因打靶技术经过20多年的发展，目前已经非常成熟，有很多种不同的表达Cre重组酶的小鼠品系被建立起来。JAX和MGI都提供了Cre工具鼠的搜索平台。我们目前也有很多品种的Cre工具鼠，如我们的库中没有，也可通过我们的渠道帮您代购。
17. Q：如果客户需要研究的基因在国际的数据库中有现成的活体小鼠或者是胚胎干细胞，公司可以提供代理进口服务嘛？
A：我们可以提供活体小鼠，冷冻胚胎，ES细胞及精子等代理进口服务。
18. Q:什么是Cre-ER小鼠？如何使用？
A:Cre-ER小鼠是Cre重组酶与人雌激素受体结合位点融合表达的转基因小鼠，仅在受雌激素（tamoxifen）诱导后发挥Cre酶重组活性。
19. Q:如何鉴定基因工程小鼠的基因型？
A: 基因工程小鼠基因型PCR鉴定的基本原则是利用基因工程小鼠基因组与野生型小鼠基因组的序列差异，通过PCR产物大小的差别区分各种不同的基因型。如果需要准确鉴定，PCR产物克隆测序是必须的。
20. Q:一般需要几对小鼠用于品系繁育？
A:一般来说，至少需要2-4对育龄小鼠用来进行品系的繁育。若特殊品系的小鼠有生育缺陷或需要加快繁育速度，那么可以扩大交配数量。
21. Q:如果小鼠繁殖遇到困难，该怎么办？
A:当小鼠繁殖过程出现子代数量减少、甚至不产仔的情况，可考虑是否有以下几个方面的问题：
1） 饲养环境噪音过大。在小鼠的繁殖饲养过程中，应尽量减少噪音，保证小鼠在安静的环境中生活。
2.）孕鼠受到外界压力刺激。母鼠在怀孕后应尽量减少对孕鼠的操作和环境改变，孕鼠及哺乳期的母鼠在受到外界刺激后可能出现食仔或弃养幼仔的情况。
3） 雄鼠与雌鼠合笼时间过短。应尽量保证雄鼠雌鼠的合笼时间，以增加交配几率。另外，孕鼠临产时不要从笼中取出交配雄鼠，也不要在子代小鼠未断奶前将雄鼠重新放入繁殖笼内。
4） 增加环境暗度。避免在夜晚节律中有不必要的亮光，影响小鼠的昼夜节律。
5）无法筑巢。在笼中提供柔软的纤维材料，如：棉絮、纸巾或软木絮等，有助于提供安全舒适的生产环境，提高产量。
6）营养缺陷。小鼠饮食中若脂类成分过高或过低、蛋白质摄入不足或过剩都会影响小鼠生育。另外，可适当提供生育酚的来源，如：瓜子、坚果等。
