使用手册(目录号:KINGBIO-1423)
1 试剂盒概述:
本试剂盒是采用大肠杆菌GBE180菌株经特殊工艺处理得到的感受态细胞,转化效率可达5×107。GBE180感受态细胞是低拷贝菌种,适用于大片段DNA克隆的转化,可有效降低突变率。-70℃保存几个月转化效率不发生改变。每支感受态可以酌情分装使用,降低了实验的成本。质量稳定,使用方便,质优价廉。
2 本试剂盒内容:
GBE180感受态细胞
阳性对照质粒
3 保存条件:
-70℃
4 试剂盒以外需准备
SOC或者LB
5 实验方法与流程:
5.1 将-70℃下保存的感受态细胞置于冰上,完全解冻后轻轻地将细胞均匀悬浮。
注:一次转化感受态细胞的建议用量为 50-100 µl,可以根据实际情况分装使用。
5.2 将待转化的质粒或者连接反应物加入至感受态中,轻轻混匀,冰浴30 分钟。
注:带转化质粒或连接反应物不要超过感受态细胞悬液体积的十分之一。以下实验以100 µl 感受态细胞为例。
5.3 向每个离心管中加入 900 µl 无菌的 SOC 或LB 培养基(不含抗生素),混匀后置于 37℃摇床振荡培养 45 分钟(150转/分钟),目的是使质粒上相关的抗性标记基因表达,使菌体复苏。
5.4 室温下4000rpm离心5分钟,用枪头吸弃800ul上清液,用剩余的培养基将细胞悬浮。
5.5 将悬浮菌体涂布于一个90mm LB平板中(抗性依质粒或者连接产物而定)。
5.6 倒置平板, 37℃培养12-16h。
6 注意事项与常见问题
6.1 感受态细胞应保存在 -70℃,不可多次冻融和放置时间过长,以避免降低感受态细胞的转化效率。
6.2 进行转化操作时,应根据相应温度及无菌条件的要求进行。
6.3 为防止转化实验不成功,可以保留部分连接反应液,以重新转化,将损失降到最低。本产品仅供科研使用。请勿用于医药、临床治疗、食品及化妆品等用途。