使用手册(目录号:KINGBIO-1411)
1.试剂盒概述:
本转染试剂盒用于将外源DNA(或RNA)转染至哺乳动物细胞,并在哺乳动物细胞内表达外源目的基因。本试剂盒还提供绿色荧光蛋白GFP表达质粒,用于对转染实验的效率进行检测。
2. 试剂盒内容:
(1)EZ-TransTM转染试剂;(1.0ml, -20℃保存)
(2)GFP表达质粒;(1.0µg/µl , 30µl, -20℃保存,*可以利用流式细胞仪或荧光显微镜检测转染效率)
本试剂盒不提供,但可能需要:
Opti-MEM细胞培养液
3. 实验步骤(*按照转染10cm培养皿计算):
(1)转染前24~48小时,对细胞进行传代,使得转染时细胞密度在50%~70%之间。
(2)将10µg目的DNA加入到0.5ml Opti-MEM细胞培养液中,小心混匀。
(3)将50µl EZ-TransTM转染试剂加入到上述含有目的DNA的Opti-MEM细胞培养液中,小心混匀;室温放置10分钟后,加入6ml新鲜培液,小心混匀。
(4)吸去含有细胞的10cm培养皿的旧培液,小心加入上述6ml含有目的DNA与转染试剂的Opti-MEM细胞培养液。
(5)放置入细胞培养箱,继续培养4~6小时后,更换旧培液,加入10ml新鲜培液。
(6)继续培养24~48小时后,收集细胞,用于转染效率检测或后续实验。
4. 不同培养容器参考用量:
| DNA量 | EZ-TransTM量 | 转染时所需培液量 | 正常培养时所需培液量 |
96孔细胞培养板 | 0.2µg | 1µl | 0.12ml | 0.2ml |
24孔细胞培养板 | 1µg | 5µl | 0.6ml | 1ml |
12孔细胞培养板 | 2µg | 10µl | 1.2ml | 2ml |
6孔细胞培养板 | 3µg | 15µl | 1.8ml | 3ml |
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10cm细胞培养皿 | 10µg | 50µl | 6ml | 10ml |
15cm细胞培养皿 | 30µg | 150µl | 18ml | 30ml |
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25cm细胞培养瓶 | 5µg | 25µl | 3ml | 5ml |
75cm细胞培养瓶 | 15µg | 75µl | 9ml | 15ml |