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    基于遗传操作的基因打靶技术平台,竭诚为广大从事生命科学与医学研究的用户提供疾病动物模型制备的技术服务

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    2. 慢病毒包装技术服务

    慢病毒包装技术服务

    作者:君伯生物    发布时间:2016-12-29    阅读次数:2480

    当代基因治疗研究的热门方法是将外源基因DNA或RNA片段导入靶细胞或组织,研究靶基因的上调或抑制情况。例如,有些异常基因(癌基因、病毒基因),可通过反义核酸技术引入外源片段将其抑制;有些基因本身有治疗作用,体外合成该基因导入体内使其表达丰度提高。

    常用的几种病毒载体的区别


    病毒载体已成为当前基因治疗载体研究的热点,其优势在于:

    1、 病毒包装技术经历了多年的研究,已趋于成熟,可用于产业化大量生产

    2、 病毒基因组的结构简单、分子背景比较清楚,稳定易于改造、易于制备

    3、 病毒的宿主范围广,且具有高效的靶向特异性

    4、 在目的基因表达方面相对于脂质体介导的效果更明显、长时、稳定

    5、 通过载体改造的方式形成了复制缺陷型结构,安全性高



    慢病毒(Lentivirus) 载体是以HIV-1(人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。作为快速有效的遗传物质投递工具,慢病毒的应用在生物医疗研究领域已广泛流行。


    特点

    1、 区别一般的逆转录病毒载体,它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力,常用于感染难转染的细胞,如原代细胞、神经元细胞、干细胞、不分化细胞、心肌细胞、肝细胞、内皮细胞、肿瘤细胞,且效率近100%

    2、 可装载DNA片段容量高达6kb

    3、 目的基因进入到宿主细胞之后,经过反转录,整合到基因组,形成稳定遗传物质,使得目的基因在细胞中可稳定长期表达。

    4、 病毒载体颗粒通过包装元件和含病毒基因组质粒共转染包装细胞系。利用逆转录机制构建自我失活(SIV)的HIV-1来源的载体,一旦转移到靶细胞后,它就丧失了病毒长末端重复的转录能力,减少了产生重组病毒的机会,并避免了与启动子干扰的问题。


    综上特点决定了其应用

    1、 用慢病毒载体携带目的基因比用质粒瞬时转染更适于稳转株构建

    2、 载体带有可进行高效率的包装、转染并稳定整合进靶细胞的基因组中的序列元件,其产生滴度更高,为活体动物模型实验提供高性价比的包含目的基因的病毒液

    3、 其高转导效率及整合到基因组的特点为RNAi和cDNA 克隆以及报告基因的研究提供了一个有利的途径

     

    慢病毒包装服务流程

    1、 制备DNA/转染试剂复合物

    2、 转染工具细胞:通常使用293T细胞

    3、 收获病毒

    4、 去除蛋白等杂质

    5、 检测滴度

     

    服务提供

    1、 不少于1ml慢病毒包装产物

    2、 滴度不低于108

    3、 提供对照载体

    4、 提供包含实验过程和中间结果的详细技术报告

     

    注意要点

    1、 包装好的病毒可以根据用户要求感染目的细胞

    2、 RNA干扰慢病毒提供三条不同的shRNA序列

     

    服务周期

    3-6周

     


    上海君伯生物科技有限公司

    Shanghai Kingbio Biosciences Inc

    • 君伯生物

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